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厭氧菌的培養方法

2009-09-14 [4031]

     厭氧菌在有氧的情況下不能生長。要培養厭氧菌,必須創造一個無氧的環境。通常用培養基中加入還原劑,或用物理、化學方法去除環境中的游離氧,以降低氧化還原電勢。如皰肉培養基、硫基乙酸鈉培養基,牛心腦浸液培養基等。常用的厭氧培養方法有許多,可根據實際情況選用。

 1.厭氧缸法接種好標本的平板或液體培養基試管,可放入厭氧缸內培養,厭氧缸是普通的干燥缸,用物理化學的方法使缸內造成厭氧環境,從而將厭氧菌培養出來。
 
 2.厭氧手套箱(Anaerobie glove box)是迄今為止上*的培養厭氧菌*儀器之一。它是一個密閉的大型金屬箱,箱的前面有一個有機玻璃做的透明面板,板上裝有兩個手套,可通過手套在箱內進行操作,故名。箱側有一交換室,具有內外二門,內門通箱內先關著。欲放物入箱,先打開外門,放入交換室,關上外門進行抽氣和換氣(H2,CO2,N2)達到厭氧狀態,然后手伸入手套把交換室內門打開,將物品移入箱內,關上內門。箱內保持厭氧狀態,也是利用充氣中的氫在鈀的催化下和箱中錢殘余氧化合成水的原理。該箱可調節溫度,本身是孵箱或孵箱即附在其內,還可放入解剖顯微鏡便于觀察厭氧菌菌落,這種厭氧箱適于作厭氧細菌的大量培養研究,大量培養基可放入作預還原和厭氧性無菌試驗。金屬硬壁型厭氧箱的抽氣、充氣、厭氧環境和溫度等均系自動調節。

   3.厭氧袋(Bio-bag)即在塑料袋內造成厭氧環境來培養厭氧菌。塑料袋透明而不透氣,內裝氣體發生管(有硼氫化鈉的碳酸氫鈉固體以及5%檸檬酸安瓿)、美蘭指示劑管、鈀催化劑管、干燥劑。放入已接種好的平板后,盡量擠出袋內空氣,然后密封袋口。先折斷氣體發生管,后折斷美蘭指示劑管,命名袋內在半小時內造成無氣環境。如不突變表示袋內已達厭氧狀態,可以孵育。
  
    4.生物耗氧法:在一密閉的容器內放以生物,消耗氧氣,同時產生二氧化碳,供細菌生長用。

    5.厭氧盒:原理同厭氧袋,有成品銷售。
   
    6.皰肉培養基:本身就是一個不需特殊設備的厭氧培養法。皰肉和肉湯裝入大試管,液面封凡士林,造成無氧環境。

    7.焦性末食子酸法:在一潔凈的玻片上鋪上紗布或濾紙,均勻撒上焦性末食子酸,然后再混入NaHCO3粉末或NaOH溶液,迅速將已接種細菌的平板倒扣在上面,用融化的白蠟封邊,造成一個封閉空間。焦性末食子酸與堿反應后耗氧。該法用于厭氧不嚴格的厭氧菌的培養,簡單。如有梭狀芽孢桿菌。




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